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基因/miRNA表達水平分析驗證

作者:admin 更新時間:2022-08-01 點擊數:

  定量PCR(即時聚合酶鏈鎖反應,Real-time Polymerase Chain Reaction,簡稱 Real-time PCR、即時PCR),又稱定量即時聚合酶鏈鎖反應(Quantitative real time polymerase chain reaction,簡稱即時定量PCR)。定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行PCR起始模板量的定量。該技術可以準確的檢測基因的相對表達量和絕對表達量,被廣泛地應用與基因表達水平的研究。同時,它也作為一些組學技術的驗證,比如轉錄組測序、表達芯片等實驗結果驗證。


1. 技術重復質量評估分析;

2. Ct值計算

 △Ct(Treated)= CT(Treated_gene A)-CT(Treated_housekeeping gene)

 △Ct(Control)= CT(Control_gene A)-CT(Control_ housekeeping gene)

 △△Ct=△Ct(Treated)-△Ct(Control)

3. 對于有生物學重復的檢測,計算SD和p-value。

 


與RT-PCR相比,熒光定量PCR具有以下技術優勢:

1、實時監測:通過擴增曲線能夠實時監測PCR產物的積累。

2、特異性強:實驗完成后,溶解曲線的分析可以驗證擴增產物的特異性,降低假陽性。

3、精確定量:利用擴增進入指數增長期的CT值來定量測定起始模板量,從而實現了極為精確的核酸定量檢測。



(一)樣品類型

  1. 總RNA;樣品濃度:≥250 ng/ul;樣品總量:>5ug;樣品純度: OD260/280為1.8~2.2,OD260/230≥1.0,260nm處有正常峰值。RNA完整性: 電泳檢測28S/18S≥1.5。

  2. 組織:樣品取樣后立即液氮速凍,保存于液氮或超低溫冰箱中。請盡量使用新制備的樣品且樣品量至少滿足3次以上提??;

 

(二)樣本運輸

  1. 總RNA樣品請溶于RNase-free H2O或乙醇中,置于1.5 ml RNase-free離心管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時間,管口使用Parafilm封口,干冰運輸;

  2. 樣本取樣后置于凍存管中并標注,使用足量的干冰運輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。


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1、 提供產品資料

2、 工程師根據您品資料的產品推薦合適檢測項目,并給出報價

3、 確認報價沒有問題,然后把樣品送到我們實驗室

4、 支付檢測費用,安排檢測

5、檢測完成,出具檢測報告,郵寄給客戶

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